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        美國PSS粒度儀、意大利PSI均質(zhì)機
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        為什么乳佐MF59粒徑控制在 160nm?

        為什么乳佐MF59粒徑控制在 160nm?
        上海奧法美嘉生物科技有限公司  2023/03/23  |  閱讀:688

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        產(chǎn)品配置單:

        型號: AccuSizer 780 A7000 AD

        產(chǎn)地: 美國

        品牌: 美國PSS

        900000元 參考報價
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        型號: PSS Nicomp 380 N3000

        產(chǎn)地: 美國

        品牌:

        500000元 參考報價
        聯(lián)系電話

        型號: PSI-20、40

        產(chǎn)地: 意大利

        品牌: PSI

        1000000元 參考報價
        聯(lián)系電話

        型號: LUMiFuge

        產(chǎn)地: 德國

        品牌: LUM穩(wěn)定性分析儀

        面議 參考報價
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        方案詳情:

        均一性與穩(wěn)定性控制


        佐劑(Adjuvant)又稱免疫調(diào)節(jié)劑或免疫增強劑(Immunepotentiator),是作為疫苗的一種添加劑,當它先于抗原或與抗原混合注入機體后,能夠增強機體對抗原的免疫應(yīng)答或者改變免疫反應(yīng)的類型,屬于非特異性的免疫增強劑,而其本身無抗原性。理想的佐劑不僅能夠增強免疫反應(yīng),而且能使機體獲得最佳的保護性免疫。乳佐的均一性和穩(wěn)定性是非常重要的兩個考察項,而與此直接相關(guān)的是粒度的控制1


        最近發(fā)布在Nature的文章表明,對MF59而言,平均粒徑在160nm(MF59)左右效果比較佳2,粒徑過大及過小效果都欠佳。此外,小顆粒濃度(如<100nm)及大顆粒濃度(如>1.2μm)過高均影響最后的藥效且?guī)砀弊饔梦:ΑR虼?,除?strong>平均粒徑控制外,“過大”,“過小”顆粒濃度控制也非常重要。值得注意的是,在實際應(yīng)用中,產(chǎn)品穩(wěn)定性指標是一個非常重要的考察項,用于快速篩選配方及優(yōu)化工藝。


        GSK研究團隊著眼于更好的理解物理特性如乳佐粒徑和液滴組成對體內(nèi)藥效的影響。進一步向液滴大小的影響問題發(fā)起挑戰(zhàn),即較大的乳狀液液滴(160nm)比較小的乳狀液液滴(20nm和90nm)更有效,并了解原因。評估了液滴大小是否足以導致不同的免疫結(jié)果,或者其他生物物理屬性(例如。油:表面活性劑比)也有貢獻。評估了相同成分但不同滴尺寸的配方,以及相同液滴尺寸但成分不同的配方的免疫效果。



        樣品制備:


        通過自乳化和微射流均質(zhì)工藝制備不同尺寸粒徑的佐劑疫苗,詳情見表1

        表1 對照乳劑,用于比較液滴大小的影響(相同成分但不同液滴大小的配方)。



        通過ELISA和HI滴度檢測不同佐劑TIV抗原的體液反應(yīng)。


        不同佐劑疫苗接種誘導的抗流感抗原抗體。三價滅活流感病毒抗原:H1N1 A/California/7/09, H3N2 A/Texas/50/2012和B/ Massachusetts/2/2012,每三周注射一次0.1 ug。動物被分為每組10只,分別給予PBS、無佐劑TIV和佐劑SEA20、MFA90、MFA160、SEA160、MF59、稀釋SEA160和稀釋MF59的TIV。用ELISA (A)分析2wp2的血清,分別檢測每種抗原的IgG。單因素方差分析(One-way ANOVA)和Dunnett多重比較(multiple comparison)的事后分析(post hoc analysis)顯示,滴度為160 nm的佐劑,尤其是SEA160、稀釋后的SEA160和稀釋后的MF59與MF59無統(tǒng)計學差異。Kruskall Wallis使用PBS進行的多重比較顯示,160 nm佐劑組——SEA160、稀釋SEA160、MF59和稀釋MF59在統(tǒng)計學上高于PBS。(B)分別分析每種抗原的功能性血凝抑制(HI)滴度。采用Dunnett多重比較的單因素方差分析和事后分析顯示,對于滴度為160 nm的HIN1和B/Massachusetts佐劑,特別是SEA160,稀釋后的SEA160和稀釋后的MF59與MF59無統(tǒng)計學差異。Kruskall Wallis使用PBS進行的多重比較顯示,對于HIN1和H3N2抗原,160 nm佐劑組- SEA160、稀釋SEA160、MF59和稀釋MF59在統(tǒng)計學上高于PBS。結(jié)果如圖1所示。


        乳劑液體尺寸的影響:

        • 對于一組不同的抗原和小鼠品系,乳劑的液滴尺寸越大,佐劑效價就越大,SEA20 <MFA90 <MFA160(原文Figure1)。


        乳劑組合位置影響

        • 佐劑效價也受到乳劑組合位置的影響,因為SEA160和MF59 (160 nm)也誘導了比MFA160 (160 nm)更高的效價(MFA160<SEA160=MF59),因為SEA160和MF59的角鯊烯含量高于MFA160。


        油含量和/或液滴數(shù)量影響

        • 將SEA160和MF59稀釋到與MFA160相同的角鯊烯含量。但這兩種稀釋配方的效價與未稀釋的對照品相似,這表明單個液滴組成似乎對效價有影響,而不是含油量或液滴數(shù)量。


        表面活性劑比例

        • SEA160和MF59的表面活性劑Span85和Tween80比例相同,而SEA20、MFA90或MFA160的表面活性劑比例不同(Tween80高;與無佐劑抗原相比,只有SEA160和MF59(稀釋或未稀釋)誘導的IgG滴度在統(tǒng)計學上更高(原文Figure1A),而SEA160誘導的滴度與MF59無統(tǒng)計學差異。



        圖1過ELISA和HI滴度檢測不同佐劑TIV抗原的體液反應(yīng)結(jié)果



        使用TIV抗原,評估了新型乳液佐劑的效價,并將其與已認證的基準產(chǎn)品MF59水包油角鯊烯乳液進行了比較。有趣的是,證實了乳狀液液滴大小依賴于佐劑的影響,160 nm >90nm >20 nm。由此,建立一個合理的假設(shè),即乳液佐劑的有效免疫激活可能是由液滴上表面活性劑的存在所介導的,除了液滴的大小之外,表面活性劑也可以在效力中發(fā)揮主要作用。佐劑主要通過激活先天免疫來增強免疫反應(yīng)。


        乳佐粒徑控制和穩(wěn)定性分析解決方案



        image.png                

        乳佐的常規(guī)制備方法為:制備水相、油相,經(jīng)過混合、剪切步驟形成初乳,初乳經(jīng)微射流均質(zhì)機均質(zhì),而后除菌過濾得到乳佐。初乳、均質(zhì)后乳液、除菌過濾后乳液通過PSS的Nicomp粒度分析儀測試平均粒徑、AccuSizer顆粒計數(shù)器測試過大顆粒濃度、Lum穩(wěn)定性分析儀快速篩選乳佐配方穩(wěn)定性。另通過Lumispoc檢測過小顆粒濃度。

        。                    


        產(chǎn)品介紹

        高壓微射流均質(zhì)機                    

        PSI-20高壓微射流均質(zhì)機(小試兼中試型)采用固定結(jié)構(gòu)的均質(zhì)腔,通過電液傳動的增壓器使物料在高壓作用下以極大的速度流經(jīng)交互容腔的微管通道,物料流在此過程中受到高剪切力、高碰撞力、空穴效應(yīng)等物理作用,使得平均粒徑降低、體系均一穩(wěn)定,由此獲得理想的均質(zhì)、分散或乳化結(jié)果。


                           

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        Nicomp納米激光粒度儀系列                    

        Nicomp系列納米激光粒度儀采用動態(tài)光散射原理檢測分析樣品的粒度分布,基于多普勒電泳光散射原理檢測ZETA電位。


                           


                           

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        AccuSizer顆粒計數(shù)器系列                    

        AccuSizer系列在檢測液體中顆粒數(shù)量的同時精確檢測顆粒的粒度及粒度分布,通過搭配不同傳感器、進樣器,適配不同的樣本的測試需求,能快速而準確地測量顆粒粒徑以及顆粒數(shù)量/濃度。


                           

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        LumiSpoc單粒子顆粒計數(shù)器                    

        LumiSpoc采用單粒子光散射技術(shù)(SPLS),通過在光學流通池中進行流體動力聚焦,將單個粒子排列成一條直線。通過調(diào)整流動條件來調(diào)整樣品濃度,從而避免濃度峰值的影響。當單個納米或者微米顆粒經(jīng)過特殊光束截面的激光束時,記錄其正向和側(cè)向散射的光強。根據(jù)米氏理論,將分類強度轉(zhuǎn)換為粒度分布密度。通過軟件分析顯示計數(shù)分布、顆粒濃度。在輝瑞撰寫的疫苗佐劑章節(jié)中也推薦了lumispoc用于顆粒濃度的監(jiān)測。


                           

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        LUM穩(wěn)定性分析儀                    

        Lum穩(wěn)定性分析儀可以直接測量整個樣品的分散體的穩(wěn)定性,檢測和區(qū)分各種不穩(wěn)定現(xiàn)象,如上浮、絮凝、聚集、聚結(jié)、沉降等,通過測量結(jié)果可用來開發(fā)新的配方和優(yōu)化現(xiàn)有的配方及工藝。


                           

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