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① 細(xì)胞克隆性檢測(cè)的意義

細(xì)胞克隆性檢測(cè)是指通過檢測(cè)細(xì)胞群體中是否存在單克隆性增殖，來判斷是否存在腫瘤或其他克隆性疾病的診斷方法。克隆性檢測(cè)在疾病診療中具有重要意義，尤其是在血液系統(tǒng)腫瘤、實(shí)體瘤和免疫相關(guān)疾病的診斷、治療和預(yù)后評(píng)估中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。例如，在淋巴造血系統(tǒng)疾病中，克隆性檢測(cè)可以區(qū)分反應(yīng)性增殖（如感染引起的免疫細(xì)胞增生）和惡性克隆性疾病（如淋巴瘤和白血?。４送?，在自身免疫病中，克隆性檢測(cè)可用于評(píng)估異常T/B細(xì)胞的擴(kuò)增情況，有助于鑒別疾病類型。

② 克隆性檢測(cè)方法

目前，細(xì)胞克隆性檢測(cè)的主要方法包括基因重排分析（IGH/TCR重排檢測(cè)）、免疫電泳、熒光原位雜交 (FISH) 、單細(xì)胞測(cè)序和流式細(xì)胞術(shù)等。

基因重排分析

利用PCR擴(kuò)增免疫球蛋白重鏈 (IGH) 或T細(xì)胞受體 (TCR) 基因的可變區(qū)，檢測(cè)克隆性擴(kuò)增。

優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，可用于低豐度克隆檢測(cè)；適用于T/B細(xì)胞克隆性分析。

缺點(diǎn)：無法提供細(xì)胞形態(tài)或表型信息；需要特定的引物設(shè)計(jì)以及高質(zhì)量DNA，可能受樣本降解影響。

免疫電泳

通過電泳分離血清中的免疫球蛋白，檢測(cè)是否存在單克隆性免疫球蛋白。

優(yōu)點(diǎn)：可以快速、高效地對(duì)多種蛋白同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，適用于多發(fā)性骨髓瘤等疾病的診斷。

缺點(diǎn)：靈敏度相對(duì)較低，且不能直接檢測(cè)細(xì)胞克隆性。

熒光原位雜交

利用熒光探針檢測(cè)細(xì)胞核中特定基因或染色體異常（如BCL2、MYC重排）。

優(yōu)點(diǎn)：特異性高，可直接觀察染色體異常，適用于惡性克隆性腫瘤。

缺點(diǎn)：檢測(cè)通量有限；對(duì)某些克隆擴(kuò)增的敏感性不足。

流式細(xì)胞術(shù)

相比上述方法檢測(cè)細(xì)胞克隆性，流式細(xì)胞儀檢測(cè)的最大優(yōu)勢(shì)在于，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)標(biāo)記物，提供更全面的免疫表型信息，通過不同抗原對(duì)異常細(xì)胞進(jìn)行設(shè)門再精確分析異常細(xì)胞的克隆性，特異性更高，適用于淋巴瘤、白血病的克隆性鑒定。

③ 流式如何實(shí)現(xiàn)細(xì)胞克隆性檢測(cè)

在B細(xì)胞和T細(xì)胞淋巴細(xì)胞的成熟過程中，抗原受體基因——免疫球蛋白 (IGH) 和T細(xì)胞受體 (TCR) 通過在可變 (V) 和連接 (J) 區(qū)域，或者在多樣性 (D) 區(qū)域發(fā)生基因重排，從而產(chǎn)生了適應(yīng)性免疫反應(yīng)的不同抗原結(jié)合部分，因此造就了淋巴細(xì)胞抗原特異性受體的廣泛多樣性，也是免疫系統(tǒng)應(yīng)對(duì)多種病原體的基礎(chǔ)。

體細(xì)胞基因重排組成TCR示意圖

據(jù)估計(jì)，IGH基因或TCR基因可發(fā)生超過200萬次重排。兩個(gè)正常淋巴細(xì)胞發(fā)生相同重排的可能性可以忽略不計(jì)，但是惡性淋巴細(xì)胞來源于單個(gè)腫瘤細(xì)胞，往往表現(xiàn)出相同的IGH或TCR基因重排。因此通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞IGH或TCR是否存在限制性，便可用于檢測(cè)淋巴瘤等疾病的細(xì)胞單克隆性。

TCR是T細(xì)胞表面的特征性標(biāo)志，根據(jù)TCR組成鏈的不同，可將T細(xì)胞分為αβ T細(xì)胞和γδ T細(xì)胞，其中αβ T細(xì)胞約占T細(xì)胞的95%~99%，γδ T細(xì)胞約占1%~5%。由于αβ T細(xì)胞占T細(xì)胞的絕大多數(shù)且重排率更高，目前流式主要通過對(duì)αβ T細(xì)胞的TCR的克隆分布檢測(cè)來評(píng)估T細(xì)胞克隆性，主要有兩種方案：TCR-Vβ受體庫(kù)檢測(cè)以及TRBC1/TRBC2檢測(cè)。

TCR-Vβ受體庫(kù)檢測(cè)

通過檢測(cè)TCR β鏈可變區(qū) (TCR-Vβ) 受體的多樣性來進(jìn)行克隆性檢測(cè)。正常T細(xì)胞TCR-Vβ抗原為多克隆，腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)為單個(gè)克隆的優(yōu)勢(shì)增生。貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)公司提供的TCR-Vβ受體庫(kù)試劑盒（貨號(hào)：IM3497）包含了8組24個(gè)TCR-Vβ抗體，適合于所有流式細(xì)胞儀檢測(cè)。

檢測(cè)結(jié)果圖例

正常T細(xì)胞TCR-Vβ抗原分布

單克隆性T細(xì)胞的異常表達(dá) 

由于TCR-Vβ受體的種類比較多，該受體庫(kù)試劑盒的抗體種類僅覆蓋70%左右的T細(xì)胞克隆，如果TCR-Vβ家族總和過低，可能提示存在試劑盒無法覆蓋的TCR-Vβ克隆性，也可作為單克隆性的證據(jù)。

TRBC1/TRBC2檢測(cè)

與TCR-Vβ受體庫(kù)檢測(cè)的是TCR β鏈的可變區(qū)不同，TRBC1/2檢測(cè)的是TCR β鏈恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域的抗體。在TCR基因重排過程中，T細(xì)胞受體的β亞基恒定區(qū) (TRBC) 僅有兩種多態(tài)性，即TRBC1或TRBC2，每個(gè)TCR以隨機(jī)和互斥的方式不可逆地選擇兩個(gè)恒定區(qū)域中的一個(gè)進(jìn)行表達(dá)，類似于B細(xì)胞κ和λ，為多克隆表達(dá)。當(dāng)某一TRBC群體的表達(dá)比例大于85%或小于15%時(shí)，則提示單克隆性表達(dá)。

檢測(cè)結(jié)果圖例

健康人外周血流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，總T細(xì)胞、CD4+（青色）和CD8+（橙色）T細(xì)胞上存在多型TRBC表達(dá)

單克隆T細(xì)胞表達(dá)TRBC限制性圖例

相比TCR-Vβ受體庫(kù)復(fù)雜的操作，TRBC1/2檢測(cè)是更簡(jiǎn)單高效的選擇。目前，貝克曼庫(kù)爾特生命科學(xué)公司也全新推出了TRBC1/2的檢測(cè)試劑，感興趣的小伙伴歡迎垂詢或訂購(gòu)！如需要了解更多信息，請(qǐng)與貝克曼庫(kù)爾特公司的業(yè)務(wù)代表聯(lián)系！

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