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        ECM 630電穿孔儀
        ECM 630電穿孔儀

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        美國**BTX是專業(yè)的細胞融合、電穿孔儀的生產(chǎn)廠家。ECM 630電穿孔儀在轉(zhuǎn)基因的應用領(lǐng)域中得以廣泛的應用,其無以倫比的高性能得到了全球同行的厚愛。BTX的系列產(chǎn)品適用于動植物、細菌、酵母、哺乳動物、人類細胞(包括活體細胞)的轉(zhuǎn)基因等操作,操作方法可參照相關(guān)文獻,及向廠商索要。ECM 630電穿孔儀是多才多藝型細胞轉(zhuǎn)基因儀,適應于各類細胞.

        ECM 630電穿孔儀應用舉例:

        10-500V電壓:適用于哺乳動物細胞,植物細胞

        50-2500V電壓:適用于細菌、酵母各種型號,均有多種脈沖選擇

        •細菌/酵母轉(zhuǎn)化(系統(tǒng):ECM399/630)

        電穿孔現(xiàn)在被認作是轉(zhuǎn)化細菌及酵母的***的方法。革蘭氏陰性細菌(例如大腸桿菌)一般比革蘭氏陽性細菌更容易轉(zhuǎn)化,因為他們的細胞壁組成不同。對于革蘭氏陰性細菌常??梢垣@得10的10次方轉(zhuǎn)化2/微克DNA的轉(zhuǎn)化效率,而對于革蘭氏陽性細菌,一般可以得到10的6次方轉(zhuǎn)化2/微克DNA。Chang等人(1997)成功對一個mtz-敏感的Heliobacterpylori菌株進行電穿孔以傳遞mtz抵抗性。Planelles等人(1999)使用電穿孔轉(zhuǎn)化大腸桿菌,以避免使用包裝物質(zhì)。*近電穿孔儀器方面的進展將使研究人員能夠進一步優(yōu)化細菌轉(zhuǎn)化(例如脈沖長度產(chǎn)生方面擴展的功能條件)。

        RNA、DNA、蛋白質(zhì)以及小分子都已經(jīng)通過電穿孔的方法轉(zhuǎn)入酵母。沒有必要在電穿孔前部分去除酵母細胞壁,因為在完整酵母電穿孔方面的進展可以產(chǎn)生高的轉(zhuǎn)化率。Faber等人(1994)年優(yōu)化了S.Cerevisiae的實驗方案,使用HansenulaPolymorpha獲得了比以前的報告增加300倍的轉(zhuǎn)化效率。

        在質(zhì)粒修復中,質(zhì)粒從酵母轉(zhuǎn)入大腸桿菌以進行詳細的DNA序列分析,這是另外一種重要的技術(shù)。這種兩個步驟的過程被電穿孔進行了簡化,用于驗證隱性基因的結(jié)構(gòu),將其導入酵母,看基因性和表現(xiàn)性之間的關(guān)系。已經(jīng)建立了標準的實驗方案使用指數(shù)衰減波發(fā)生器例如BTXECM630轉(zhuǎn)化細菌/酵母。使用方形波電穿孔儀的實驗方案,例如BTXECM830,來轉(zhuǎn)化細菌/酵母。研究人員還成功將大的質(zhì)粒(BAC及YAC)導入細菌。電穿孔杯是細胞及酵母電穿孔的*常用附件,而Model747共軸電極使用則變得越來越普遍。

        •動物細胞轉(zhuǎn)染(系統(tǒng):ECM630/830)

        對真核細胞的轉(zhuǎn)染可以通過多種方法獲得,例如磷酸鈣沉淀、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染、病毒方法以及電穿孔。電穿孔已經(jīng)被正式對傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法不靈的細胞有很好的效果,因此被選為**的分子傳遞系統(tǒng)。電穿孔的好處有可重復性、更高的效率、大量樣本處理、無毒性以及容易使用(不需要孵育時間)。

        Lofin等人(1999)對NIH/3T3細胞進行電穿孔使mRNA進入,以研究細胞周期及細胞分化過程中mRNA對基因表達調(diào)節(jié)、控制。Bodwell等人(1999)在對COS-7細胞進行電穿孔是使用較長的脈沖時間后獲得了較高水平的表達。Warner等人(1997)使用電穿孔方法成功轉(zhuǎn)化了淋巴細胞。IncyteGenomics公司成功使用BTX電穿孔儀轉(zhuǎn)染了ES細胞進行轉(zhuǎn)基因小鼠的生產(chǎn)。BTXECM399\630\830型儀器、電穿孔杯以及多種特用的電極都用于動物細胞轉(zhuǎn)染用途。

        •蛋白質(zhì)電整合/電插入(系統(tǒng):ECM630/830)

        將蛋白質(zhì)導入細胞以及將蛋白質(zhì)插入至細胞膜中也可以通過電穿孔來實現(xiàn)。不光肽段,而且包括抗體的多種蛋白,也可以進行導入。Ushio-Fukai等人(1998)對電穿孔插入哺乳動物細胞中的外源蛋白進行了定量。對于這些用途可以使用多種BTX電極。

        •植物細胞轉(zhuǎn)化(系統(tǒng):ECM630/830)

        對植物原生質(zhì)(玉米、煙草等)及完整植物的電穿孔可以用于產(chǎn)生對農(nóng)業(yè)/園藝有用的轉(zhuǎn)基因作物。植物細胞轉(zhuǎn)化的一個主要目的是對植物細胞進行穩(wěn)定轉(zhuǎn)化以產(chǎn)生具有優(yōu)良品質(zhì)及產(chǎn)量增加的作物。Lin等人(1997)優(yōu)化了多種植物上用于GUS表達的電穿孔條件,結(jié)果顯示完整植物細胞以及原生質(zhì)都可以進行有效轉(zhuǎn)化。Diaz等人(1994)針對小麥及燕麥的葉和根的原生質(zhì)進行了相似的優(yōu)化試驗,證明了電穿孔對于植物工作的有效性。這些作者也比較了電穿孔與PEG的差別,結(jié)果發(fā)現(xiàn)電穿孔更有效、更有重復性、更經(jīng)濟。BTX是世界上體內(nèi)轉(zhuǎn)染用特殊電極的**者。對于這些用途可以使用多種BTX電極,例如2針陣列、游標尺電極、以及Tweezertrodes。

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