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            NanoPro 1000信號轉導蛋白磷酸化分析系統(tǒng)
            NanoPro 1000信號轉導蛋白磷酸化分析系統(tǒng)

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            美國ProteinSimple公司

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            NanoPro 1000信號轉導蛋白磷酸化分析系統(tǒng)

            在細胞生物學功能研究中,有許多常規(guī)的研究手段,如流式,生物質譜,雙向電泳,蛋白芯片等技術。隨著研究的深入,科學家們特別需求進行真正意義上的高靈敏,高精度研究手段,力求通過一次實驗,快速發(fā)現更多的信息:鑒定結果更為可信,靈敏度更加提高來鑒定更多低豐度蛋白,更多的修飾信息,結構信息等。傳統(tǒng)分析技術具有很多局限性,如雙向凝膠電泳(2DE),對疏水性蛋白、堿性蛋白、特別是低豐度蛋白等無能為力,成為蛋白質組研究的瓶頸; 而質譜分析技術也是由于靈敏度等問題,需要大量的樣品等原因,十幾年來一直對研究低豐度調控蛋白缺乏信心.

            傳統(tǒng)蛋白分析技術所用的蛋白量需來自成千上萬個細胞。所得結果分辨率及重復性不理想。各種蛋白分析法所需樣品量如下:

            質譜儀樣品量 100000 個細胞

            細胞儀 樣品量:10000 個細胞

            蛋白電泳,樣品量:5000 個細胞

            蛋白芯片 樣品量:1000個細胞

            ProteinSimple公司的NanoPro 1000超微量蛋白分析系統(tǒng)為蛋白功能和信號通路研究提供了一個全新的研究方案。傳統(tǒng)的蛋白研究方法需要成千上萬的細胞,而NanoPro 1000系統(tǒng)每次分析僅需要25個細胞

            并可對超微量珍貴樣品的信號轉導蛋白之特性直接檢測,適用各種樣品包括:

            原代細胞

            FACS 分選細胞

            穿刺抽取之腫瘤細胞

            顯微切片組織細胞

            分離的干細胞群

            NanoPro系統(tǒng)利用**的毛細管樣品定位及分析技術,結合毛細管分離及化學發(fā)光檢測原理進行納米級的自動化實驗,避免了人為操作誤差,有效提高檢測結果的精確性和重復性。過去蛋白檢測儀無法檢測到的信息,如細胞內控制通路的調控信息,可由此精確測得。

            NanoPro技術被用來分析信號轉導過程中所涉及的蛋白構象上的極細微變化。

            NanoPro1000從新的角度分析蛋白調控機制,NanoPro技術采用等電點電泳的方法將不同構象的蛋白分離。該方法大大推進了多個領域的研究,包括:

            藥物開發(fā)-篩選激酶抑制劑藥物的作用靶點

            生物標記物的發(fā)現和確認-觀察疾病引起的蛋白構象的細微變化,研究其發(fā)病機制

            腫瘤蛋白活性-研究組織和細胞中腫瘤蛋白的調控機制翻譯后修飾的研究-檢測蛋白構象改變引起的等電點極細微的變化

            NanoPro 1000將蛋白分離與檢測技術相結合:

            NanoPro將毛細管等電點電泳和化學發(fā)光免疫測定這兩種常用的蛋白檢測技術相結合。等電點電泳可將不同構象的蛋白分離。分離后蛋白被儀器固定在毛細管壁上,接著用化學發(fā)光免疫的方法檢測蛋白。這為信號轉導蛋白的檢測提供了新的視角。

            【操作流程】

            上樣

            每個毛細管中加400nl樣本混合物,包括樣本、熒光標記PI和兩性電解質。

            分離

            毛細管兩端加電壓,樣本中的蛋白質隨著自身等電點的不同,加以分離。

            固定

            毛細管在紫外光照射下,其毛細管壁上的**化學物質被激活,從而將分離的蛋白異構體固定在毛細管壁上。

            免疫標記

            用洗脫液將非特異結合的蛋白質洗脫,將固定的蛋白質進行免疫反應,加入發(fā)光催化劑誘導其化學發(fā)光,發(fā)光信號被CCD攝像機拍攝下來。

            結果分析

            通過專業(yè)的軟件,對結果進行定量分析

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