編號(hào)：NMJS05725
篇名：基于納米抗體-堿性磷酸酶融合蛋白的一步酶聯(lián)免疫吸附分析法檢測(cè)黃曲霉毒素B_1
作者：曹冬梅[1] ;許楊[1,2] ;涂追[1] ;李燕萍[2] ;熊亮[1,3] ;付金衡[2]
關(guān)鍵詞：抗黃曲霉毒素B_1納米抗體 堿性磷酸酶 融合表達(dá) 酶聯(lián)免疫吸附分析
機(jī)構(gòu)： [1]南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,南昌330047; [2]南昌大學(xué)中德聯(lián)合研究院,南昌330047; [3]贛南醫(yī)學(xué)院預(yù)防醫(yī)學(xué)系,贛州341000
摘要： 從噬菌體展示的抗黃曲霉毒素B1（AFB1）納米抗體文庫(kù)中,通過四輪親和淘選,得到抗AFB1納米抗體G8。將編碼納米抗體G8的基因與堿性磷酸酶（AP）基因融合,構(gòu)建了重組融合表達(dá)載體pET25b（＋）-G8-AP,將其轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（Rosetta,DE3）感受態(tài)細(xì)胞,異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)融合基因表達(dá)。SDS-PAGE結(jié)果表明,融合蛋白G8-AP為可溶性表達(dá),Ni^2＋-NTA親和層析柱純化融合蛋白,對(duì)硝基苯磷酸二鈉（pNPP）法測(cè)得純化后的G8-AP的堿性磷酸酶比活力為（364.5±8.3）U/mg。ELISA檢測(cè)結(jié)果表明,G8-AP具有特異識(shí)別AFB1的活性,與其它真菌毒素（AFB2、AFG1、AFG2、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏馬菌素B1）無交叉反應(yīng)�；贕8-AP建立了檢測(cè)AFB1的一步ELISA法。在優(yōu)化的條件下,即甲醇濃度20%、鹽離子濃度20 mmol/L、pH 7.4條件下,方法的半數(shù)抑制濃度（IC（50））為19.8 ng/mL,線性范圍為4.3-92 ng/mL,檢出限為2.6 ng/mL。對(duì)玉米和小麥樣品加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,基質(zhì)對(duì)本方法的干擾不明顯,可用于實(shí)際樣品檢測(cè)。
