編號(hào)：FTJS05724
篇名：改良固相吸附法在HCV RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)中的應(yīng)用
作者：張寶華； 王紅； 倪二茹；
關(guān)鍵詞：納米二氧化硅； 固相吸附； 聚合酶鏈反應(yīng)；
機(jī)構(gòu)： 南京軍區(qū)福州總醫(yī)院第二住院部檢驗(yàn)科； 北京總參管理保障部北極寺門診部；
摘要： 目的通過對(duì)固相吸附法的改良,探討采用固相吸附法提取血清中丙型肝炎病毒RNA在實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)中的應(yīng)用。方法首先對(duì)HCV RNA的提取方法進(jìn)行改良,對(duì)固相載體納米二氧化硅顆粒表面進(jìn)行硅醇基化以提高其核酸吸附能力;同時(shí)對(duì)病毒裂解液進(jìn)行優(yōu)化,獲得異硫氰酸胍(GuSCN)的最佳濃度用于HCV RNA的提取;最后使用改良方法提取的HCV RNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),并繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出線性方程,同時(shí)檢測(cè)該提取方法下實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)血清樣本中HCV RNA的最低檢測(cè)限并對(duì)其檢測(cè)重復(fù)性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果納米二氧化硅顆粒硅醇基化后其吸附核酸的能力顯著提高;病毒裂解液中GuSCN的最佳濃度為4.23mol/L。使用改良方法提取血清樣本中的HCV RNA用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR,獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性方程,其線性相關(guān)系數(shù)(R2)達(dá)到0.999,檢測(cè)的線性范圍為2.52~5.52IU/mL,或者102.52~105.52病原體數(shù)/毫升。該方法的檢測(cè)限達(dá)到(2.52±0.50)IU/mL,且其檢測(cè)重復(fù)性良好。結(jié)論改良后的固相吸附法可以大大降低實(shí)時(shí)熒光定量PCR的最低檢測(cè)限,提高了HCV的陽性檢測(cè)率。該方法操作簡(jiǎn)單,成本低,可以廣泛應(yīng)用于臨床中HCV的檢測(cè)和其他病毒的核酸檢測(cè)。
