大昌華嘉科學(xué)儀器部
已認(rèn)證
大昌華嘉科學(xué)儀器部
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一、樣品前處理
1、 所用試劑
必須使用重蒸餾水或與之等質(zhì)的水(電導(dǎo)率<10μs)
1、1 雙氧水,30%
1、2 甲酸,98-100%
1、3 苯酚:須重蒸
1、4 偏重亞硫酸鈉
1、5 氫氧化鈉
1、6 鹽酸,ρ=1.18g/ml
1、7 水解劑:6mol/l 的HCL,1L含1g苯酚:
加1g苯酚(3.3)到492mL鹽酸(3.7)中,然后用水定容至1L
1、8 20種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品
2、 標(biāo)樣配置
氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱取上述各氨基酸標(biāo)樣使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。
取氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液與PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的標(biāo)準(zhǔn)液。
3、 前處理設(shè)備
1) 天平
2) 水解管
3) 量筒
4) 無油真空泵
5) 干浴水解、濃縮儀
6) 移液管
7) 0.45um濾膜
4、 樣品制備(參考?xì)W盟飼料指令98/64/EC )
1、 樣品的準(zhǔn)備
粉碎樣品,通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風(fēng)干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油(3.12)脫脂。
2、 氧化
從準(zhǔn)備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品,準(zhǔn)確到0.2mg,于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中,稱取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮,水分不能超過100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃,加5ml氧化試劑(過甲酸苯酚),用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封,密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中,放置16小時(shí)。之后,從冰箱中取出,加0.84克偏重亞硫酸鈉(3.4)來分解過量的氧化試劑。
3、 水解
加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中,溫度控制在110攝氏度,旋松帽子(防止玻璃瓶子破裂),水解1小時(shí)。然后快速旋緊瓶塞(戴手套和護(hù)眼罩)將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時(shí)。
4、 加入內(nèi)標(biāo)并且調(diào)節(jié)pH值到2.20
當(dāng)水解反應(yīng)結(jié)束后,將反應(yīng)瓶從烘箱中取出,并且打開瓶口(戴手套和護(hù)目鏡)。冷卻后用定量加樣器準(zhǔn)確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實(shí)驗(yàn)燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。
轉(zhuǎn)移一部分溶液(不需要全部)到50毫升有蓋子的塑料瓶中??梢择R上測定或者放入冰箱等到分析的時(shí)候測定。
二、分析方法描述(Biochrom 30+)
氨基酸分析儀分析方法參數(shù):
1) 色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.6′20cm
2) 分離程序:
3) 運(yùn)行時(shí)間:分析時(shí)間65min
4) 反應(yīng)單元溫度:135°C。
5) 檢測波長:570nm、440nm同時(shí)檢測。
三、外標(biāo)法定量
附、小雞配合飼料分析圖譜
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