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        Biochrom30+氨基酸分析儀檢測石斑魚中水解氨基酸

        Biochrom30+氨基酸分析儀檢測石斑魚中水解氨基酸
        麥奇克/Microtrac  2019-09-16  |  閱讀:2330

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        Biochrom30+氨基酸分析儀檢測石斑魚中水解氨基酸

         

         

         

         

         

        摘要:

        以石斑魚為原料,使用Biochrom30+全自動(dòng)氨基酸自動(dòng)分析儀對(duì)其肌肉的氨基酸組成進(jìn)行分析。結(jié)果表明石斑魚肌肉中氨基酸總量的質(zhì)量百分比為17753.114mg/100g,必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸總量的40.63%,鮮味氨基酸占氨基酸總量的38.52%。

         

         

         

         

         

        1. 樣品前處理

        2. 所用試劑

          1. 濃鹽酸,濃度≥36%,優(yōu)級(jí)純

          2. 6mol/L 鹽酸:取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻。

          3. 水:去離子水

          4. 苯酚:須重蒸

          5. 17種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

        行號(hào)

        氨基酸

        行號(hào)

        氨基酸

        1

        Asp       

        天冬氨酸

        2

        Thr

        蘇氨酸

        3

        Ser       

        絲氨酸

        4

        Glu

        谷氨酸

        5

        Pro       

        脯氨酸

        6

        Gly

        甘氨酸

        7

        Ala       

        丙氨酸

        8

        Cys

        胱氨酸

        9

        Val       

        纈氨酸

        10

        Met

        蛋氨酸

        11

        Ile        

        異亮氨酸

        12

        Leu

        亮氨酸

        13

        Tyr

        酪氨酸

        14

        Phe       

        苯丙氨酸

        15

        His

        組氨酸

        16

        Lys

        賴氨酸

        17

        Arg

        精氨酸




         

        1. 前處理設(shè)備

        2. 分析天平:感量分別為 0.0001g和0.00001g。

        3. 水解管:耐壓螺蓋玻璃試管,體積為25mL

        4. 勻漿機(jī)。

        5. 無油真空泵

        6. 干浴水解濃縮儀

        7. 移液管

        8. 0.22um濾膜

           

        9. 樣品制備(參考國標(biāo)GB 5009.124-2016

          原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內(nèi)臟,采肉后清洗、瀝干,在勻漿機(jī)中打成肉糜,于-18℃冰箱中冷凍保存,分析時(shí)取出解凍后使用。

           

        10. 試樣水解

          稱取含蛋白7.5-25mg的試樣,加入水解管中,加入15mL 6mol/L鹽酸,繼續(xù)向水解管內(nèi)加入苯酚3滴~4滴。冷凍3min~5min,接到真空泵的抽氣管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮?dú)?重復(fù)抽真空-充入氮?dú)?次后,在充氮?dú)鉅顟B(tài)下擰緊螺蓋。 將水解管放入干浴水解濃縮儀中,110°C水解22-24h,冷卻、混勻、開管、轉(zhuǎn)移并定容到50ml容量瓶中,用移液管取適量樣液,在干浴水解濃縮儀中50°C吹干,必要時(shí)加入少許水,重復(fù)吹干1-2次,加入3-5mL PH2.2的稀釋上機(jī)用檸檬酸鈉緩沖液溶解,振蕩混勻后,吸取溶液通過0.22μm 濾膜后,轉(zhuǎn)移至儀器進(jìn)樣瓶,為樣品測定液,供儀器測定用。

           

        11. 分析方法描述(Biochrom 30+

          氨基酸分析儀分析方法參數(shù):

        12. 色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.620cm

        13. 分離程序:

        NO.

        Time

        Temp

        Buffer

        Pump

        Nin

        Rec

        Commands

        1

        01:00

        48

        1

        35.0ml/h

        ON

        OFF


        2

        00:00

        48

        1

        35.0ml/h

        ON

        OFF

        Reset

        3

        01:00

        48

        1

        35.0ml/h

        ON

        OFF

        Load

        4

        06:40

        48

        1

        35.0ml/h

        ON

        ON


        5

        13:00

        52

        2

        35.0ml/h

        ON

        ON


        6

        01:00

        52

        5

        35.0ml/h

        ON

        ON


        7

        16:00

        95

        5

        35.0ml/h

        ON

        ON


        8

        04:00

        95

        6

        35.0ml/h

        ON

        ON


        9

        04:00

        95

        1

        35.0ml/h

        ON

        ON


        10

        09:00

        48

        1

        43.0ml/h

        OFF

        OFF


        11

        02:00

        48

        1

        35.0ml/h

        ON

        OFF


        End








         

        1. 運(yùn)行時(shí)間:經(jīng)分析時(shí)間+再生時(shí)間 57min

        2. 反應(yīng)單元溫度:135°C。

        3. 檢測波長:570nm、440nm同時(shí)檢測。

           

           

        4. 樣品中氨基酸含量的計(jì)算

             樣品測定液氨基酸的含量按式(2)計(jì)算:

          ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

          式中:

          ci ———樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

          Ai ———試樣測定液氨基酸i的峰面積;

          As ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的峰面積;

          cs ———氨基酸標(biāo)準(zhǔn)工作液氨基酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。

           

          試樣中各氨基酸的含量按式(3)計(jì)算:

          Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100 ……………………(3)

          式中:

          Xi ———試樣中氨基酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);

          ci ———試樣測定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

          F ———稀釋倍數(shù);

          V ———試樣水解液轉(zhuǎn)移定容的體積,單位為毫升(mL);

          M ———氨基酸i的摩爾質(zhì)量,單位為克每摩爾(g/mol);

          m ———稱樣量,單位為克(g);

          109 ———將試樣含量由納克(ng)折算成克(g)的系數(shù);

          100 ———換算系數(shù)。

           

           

           

           

           

           

           

           

           

           

          附、石斑魚分析圖譜及做樣結(jié)果

           

           

           

           

           

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