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        馬爾文帕納科
        Malvern Panalytical

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        【熱點應(yīng)用】Zetasizer精準(zhǔn)表征慢病毒載體 (LV) 顆粒粒徑及滴度

        【熱點應(yīng)用】Zetasizer精準(zhǔn)表征慢病毒載體 (LV) 顆粒粒徑及滴度
        馬爾文帕納科  2024-07-23  |  閱讀:1159

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        本文通過介紹馬爾文帕納科納米粒度及電位儀Zetasizer Ultra用于慢病毒載體顆粒粒徑及載體滴度表征的實驗設(shè)置及檢測結(jié)果。讓您快速實現(xiàn)慢病毒載體(LV)關(guān)鍵質(zhì)量屬性的評估。


        慢病毒載體(Lentiviral vector, LV)是在HIV-1病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng),可以將外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果??捎行У馗腥旧窠?jīng)元細(xì)胞、肝細(xì)胞、心肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、干細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞,從而達到良好的的基因治療效果。對于一些較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞, 如原代細(xì)胞、干細(xì)胞、不分化的細(xì)胞等,使用慢病毒載體,能大大提高目的基因或目的shRNA的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主細(xì)胞基因組的幾率大大增加,能夠比較方便快捷地實現(xiàn)目的基因或目的shRNA的長期、穩(wěn)定表達。(部分內(nèi)容來自百度百科)


        所以,在體外實驗及體內(nèi)實驗的研究中慢病毒載體(LV)與腺病毒(Ad)和腺相關(guān)病毒(AAV)同為主流的病毒載體系統(tǒng)。其顆粒粒徑約為90-120nm。


        在慢病毒載體(LV)的生產(chǎn)工藝中,有無團聚體 (aggregate),以及載體滴度(titer)的高低是重點考察的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQAs)。Zetasizer Ultra納米粒度儀通過對LV顆粒的粒徑及載體滴度的表征,快速實現(xiàn)CQAs的測量。

        圖片

        Zetasizer Ultra 納米粒度電位儀



        實驗方法設(shè)定


        使用Zetasizer Ultra-Red以及小體積石英比色皿(ZEN2112)進行相應(yīng)的粒徑和滴度測定。樣品測試體積為20μL,LV折射率、吸收率分別設(shè)置為1.45和0.001。



        分析結(jié)果


        通過多角度動態(tài)光散射(multi-angle DLS, MADLS)技術(shù),我們對LV粒度大小及分布進行表征(圖1) 。圖中有兩個粒徑分布峰,分別位于106.4以及430.6nm,這說明體系中除了LV單體,還有團聚體產(chǎn)生。


          

        圖片

        圖1 LV樣品的光強粒徑分布圖


        圖片

        圖2 LV樣品的載體滴度


        此外,除了基于MADLS技術(shù)得到的顆粒的準(zhǔn)確粒徑分布圖,我們還得到對應(yīng)尺寸的載體滴度信息(圖2)??梢钥吹絃V單體的顆粒濃度約1x1012個顆粒/mL,團聚體顆粒濃度約為1x1010個顆粒/mL,僅為單體的1%。單體和聚集體濃度相差較大的情況下,Zetasizer仍可很好的區(qū)分單體和聚集體。


        點擊拓展閱讀:Zetasizer用于rAAV顆粒粒徑及衣殼滴度


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